SDS聚丙烯酰胺凝胶染色是蛋白质研究的一个基础方法。染色方法有很多，实际应用中，考马斯亮蓝染色(考染)和银染是运用的最多的方法。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色，它与蛋白质结合后变为蓝色，结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

银染实验中，在碱性条件下，银离子被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上显色。蛋白电泳后的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶在甲醇溶液中浸泡后，水洗后用硝酸银溶液银染，再水洗后用碳酸钠甲醇水溶液显色。

与考染相比，银染具有灵敏度高的优点，很多做环境、植物、育种等方面的客户，都会做银染方面的实验。银染对于试剂的要求比较高，尤其对其中使用纯水的水质要求比较高。

一、仪器和试剂

乙酸(1%)，显影液(2.5%碳酸钠和0.02%甲醛水溶液)，乙醇(30%)，固定液(乙醇:冰醋酸:水(30:10:60))，硝酸银溶液(0.1%)，显影液(将溶液A在850 mL去离子水中加入37 g NaCl和37 g CuSO4，再加入浓氨水直到深蓝色沉淀形成然后溶解，定容至1 L)和溶液B(在900 mL去离子水中加入436 g 硫代硫酸钠，定容至1 L)混合，加三倍水稀释，立即使用

二、试验方法

1. 通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质;

2. 将凝胶浸泡在至少5倍体积的固定液中，室温下平缓摇动4 - 12 h，使蛋白固定;

3. 弃去固定液，加至少5倍体积的30%乙醇，室温下平缓摇动30 min;

4. 重复步骤3;

5. 弃去乙醇，加10倍体积的纯水(去离子水)，室温下平缓摇动10 min;

6. 重复步骤5两次;

7. 弃去清洗用水，加5倍体积的硝酸银溶液，室温下平缓摇动30 min;

8. 弃去硝酸银溶液，用纯水(去离子水)漂洗凝胶两面，每面20 s;

9. 加5倍体积的新鲜显影液，室温下平缓摇动，数分钟内出现蛋白质的染色条带，继续至条带清晰;

10. 用1%乙酸清洗凝胶终止反应，再用纯水(去离子水)水漂洗数次，每次10 min。

银染后的凝胶可以通过凝胶成像系统或扫描仪转化为照片，或者可以直接用手机拍摄。

在银染实验中，纯水(去离子水)水质非常重要，对实验成功与否起着关键性的作用。有用户在实验中忽略了这一点，纯水水质不佳，导致氯离子含量超标，浸泡时出现硝酸银沉淀，沉淀在胶上，最后显影的时候看到的是一片花花的乱象，影响了染色效果。

氯化银的溶解度通常是2 ppm，氯离子是水中常见的一种离子杂质，如果水中的氯离子超过2 ppm，即有可能出现杂质，也就是说，对于银染实验，对于纯水质量的要求还是比较苛刻的，一般的反渗透纯水(RO)设备，还难以达到要求。

另外，水中的颗粒物也会吸附银离子沉淀显色，污染背景，甚至让好好的凝胶成了“大花脸”。因此制备出来的纯水在使用前，还应该通过0.22或0.45μm的过滤器预先过滤，以去除水中的颗粒物。

专业来讲，银染用水应该尽量选用符合国标《分析实验室用水规格和试验方法》(GB/T 6682-2008二级纯水以上的水—电导率至少应当在 1 μS/cm以下。

因此，银染用水应当使用EDI纯水或者超纯水，而RO 纯水是不能满足银染用水需求。

国内做实验室EDI纯水设备的厂家很少。渗源是国内最早生产EDI实验室纯水设备的供应商。渗源新一代SYH智能型一体化超纯水系统可以同时制备EDI 纯水和超纯水。SYH生产的 EDI 纯水水质完全满足银染实验，还可以用来配制其他相关实验的试剂;超纯水可以应用于银染实验的上下游以及其他蛋白质研究实验，例如蛋白SDS-PAGE电泳、Western Blotting等。取水终端安装的终端微滤器，可以制备无热原(内毒素)、核酸酶、细菌的超纯水，用于生化分析和分子生物学。